CCK-8实验的坑，来避一下

0⃣1⃣确保药物和CCK8在培养基中均匀分布。 0⃣2⃣细胞增殖越多，颜色越深；细胞毒性越强，颜色越浅。 0⃣3⃣对于贴壁细胞，每孔至少1000个细胞（100μl培养基）。对于白细胞，由于其低灵敏度，每孔（100μl培养基）至少需要2500个细胞。推荐的96孔板每孔的最大细胞数为25000。如果使用24孔或6孔板进行测试，则计算每孔的相应细胞数量，并将CCK8的体积调整为每孔总液体体积的10%。 0⃣4⃣由于CCK8测定基于活细胞中的脱氢酶活性，因此影响脱氢酶活性的条件或化学物质可能会导致活细胞的实际数量与使用CCK8测量的活细胞数量之间的差异。 0⃣5⃣如果使用还原剂（如一些抗氧化剂），它会干扰测试。如果待测系统中存在更多的还原剂，则有必要将其清除。 0⃣6⃣孵育2小时后，背景O.D.值通常为0.1-0.2单位。 0⃣7⃣不要将气泡引入孔中，避免干扰外径值。 0⃣8⃣如果要对CCK8溶液进行消毒，使用0.2μm的膜过滤溶液。 0⃣9⃣孵育时间将根据孔中细胞的类型和数量而变化。一般来说，白细胞颜色较浅，可能需要更长的孵育时间（长达4小时）或大量的细胞（约105个细胞/孔）。 1⃣0⃣如果细胞悬浮液中有高浊度，测量并减去样品在600 nm或更高波长下的O.D值。 1⃣1⃣CCK8不能用于活细胞染色。 1⃣2⃣培养基中的酚红不影响实验结果。计算时，可以通过减去空白孔中背景的吸光度来消除酚红的吸光度，因此不会影响检测。 1⃣3⃣CCK8的毒性很低。CCK8测定完成后，相同的细胞可用于其他细胞增殖测定，如结晶紫测定、中性红测定或DNA荧光测定。（除非细胞极为罕见，否则不建议使用。） 1⃣4⃣CCK-8试剂盒可用于大肠杆菌，但不能用于酵母菌等真菌的检测。 1⃣5⃣在检测孔板之前，可以在摇床上轻轻摇一下30S也足够。 1⃣6⃣建议在平板中心附近的孔中接种细胞。最外圈孔中的介质很容易蒸发，可以用PBS、水或介质填充。 1⃣7⃣如果你没有450nm滤光片。可以使用吸光度在430至490 nm之间的滤光片，以及450 nm滤光片以获得最佳灵敏度。 1⃣8⃣测量450nm处的吸光度。如果需要进行双波长测量，可以将650nm处的吸光度确定为参考波长。 1⃣9⃣药物中金属离子的存在可能会影响CCK8的敏感性。终浓度为1mM的氯化铅、氯化铁和硫酸铜抑制了5%、15%和90%的显色反应，降低了灵敏度。如果最终浓度为10mM，它将被100%抑制。 密码子 cck8 实验 科研 转自《启达生物》